1）細(xì)胞增殖

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)是判定細(xì)胞活力的重要指標(biāo)，有多種顯示方法，除實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞計(jì)數(shù)法之外，還可以進(jìn)行細(xì)胞分裂指數(shù)的測定。細(xì)胞分裂是細(xì)胞增殖的方式，能比較確切地反映細(xì)胞增殖度。

① CCK-8法：CCK-8試劑盒是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞 毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。WST-8是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先，MTT 被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比線性范圍更寬，靈敏度更高。

② EdU染色：EdU（5-ethynyl-2’-deoxyuridine），中文名為5-乙炔基-2’-脫氧尿苷，是一種新型胸苷（胸腺嘧啶脫氧核苷，thymidine）類似物，EdU可以在DNA合成過程中替代胸苷摻入到新合成的DNA中。另一方面，EdU上的乙炔基能與熒光標(biāo)記的小分子疊氮化物探針（如Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555、Azide Alexa Fluor 594、Azide Alexa Fluor 647等）通過一價(jià)銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱作點(diǎn)擊反應(yīng)。通過點(diǎn)擊反應(yīng)，新合成的DNA會(huì)被相應(yīng)的熒光探針?biāo)鶚?biāo)記，從而可以使用適當(dāng)?shù)臒晒鈾z測設(shè)備檢測到增殖的細(xì)胞。

③ 克隆形成：克隆形成實(shí)驗(yàn)是測定單個(gè)細(xì)胞增殖能力的有效方法。所謂克隆是指單個(gè)細(xì)胞在體外持續(xù)增殖6代以上其后所形成的細(xì)胞群，形成肉眼可見的克隆。通過計(jì)數(shù)得出克隆形成率，可對(duì)受檢細(xì)胞的增殖潛力作定量分析。

④ 流式周期檢測：細(xì)胞周期（Cell Cycle）是指細(xì)胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過程，細(xì)胞的遺傳物質(zhì)復(fù)制并均等地分配給兩個(gè)子細(xì)胞。細(xì)胞周期分為間期與分裂期兩個(gè)階段。間期又分為三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）與DNA合成后期（G2期）。某些細(xì)胞在分裂結(jié)束后暫時(shí)離開細(xì)胞周期，停止細(xì)胞分裂，執(zhí)行一定生物學(xué)功能（G0期）。流式細(xì)胞儀PI染色法檢測細(xì)胞周期的原理：由于細(xì)胞周期各時(shí)相的DNA 含量不同，通常正常細(xì)胞的G1/G0期具有二倍體細(xì)胞的DNA含量（2N），而G2/M期具有四倍體細(xì)胞的DNA含量（4N），而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。PI可以與DNA結(jié)合，其熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量。因此，通過流式細(xì)胞儀PI染色法對(duì)細(xì)胞內(nèi)DNA含量進(jìn)行檢測時(shí),可以將細(xì)胞周期各時(shí)相區(qū)分為G1/G0期、S期和G2/M期，獲得的流式直方圖對(duì)應(yīng)的各細(xì)胞周期可通過特殊軟件計(jì)算各時(shí)相的細(xì)胞百分率。

2）凋亡檢測

① 流式凋亡檢測：細(xì)胞膜組分磷酯酰絲氨酸（PS）在正常情況下位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，當(dāng)細(xì)胞壞死或者凋亡時(shí)，PS遷移至細(xì)胞膜外側(cè)。磷脂結(jié)合蛋白V（Annexin V）是一種鈣依賴性的磷脂結(jié)合蛋白，它與PS具有高度的結(jié)合力。熒光素FITC標(biāo)記的Annexin V可以作為探針檢測暴露在細(xì)胞膜外側(cè)的磷酯酰絲氨酸，指示壞死或凋亡的細(xì)胞。FITC-Annexin V結(jié)合到細(xì)胞后，在藍(lán)色光的激發(fā)下，發(fā)出綠色熒光。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）是一種核酸染料，它不能透過完整細(xì)胞膜，但對(duì)凋亡晚期細(xì)胞和死細(xì)胞的破損細(xì)胞膜能夠穿透，并使細(xì)胞核紅染，而細(xì)胞膜保持完好的早期凋亡細(xì)胞則不會(huì)有紅色熒光產(chǎn)生。聯(lián)合應(yīng)用Annexin V-FITC和PI對(duì)培養(yǎng)體系中的細(xì)胞進(jìn)行染色，Annexin V（-）/PI（-）代表健康活細(xì)胞，Annexin V（+）/PI（-）代表早期凋亡細(xì)胞，Annexin V（+）/PI（+）代表晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞。

② Hechst染色：細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，染色質(zhì)會(huì)固縮。所以Hoechst 33258染色后，在熒光顯微鏡下觀察，正常細(xì)胞的細(xì)胞核呈正常的藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核會(huì)呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，顏色有些發(fā)白。

③ Tunle檢測：細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180-200 bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時(shí)，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase，TdT）的催化下加上綠色熒光探針熒光素（FITC）標(biāo)記的dUTP（luorescein-dUTP），從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。

3）遷移和侵襲

① Transwell：細(xì)胞遷移與侵襲實(shí)驗(yàn)將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔，將研究的細(xì)胞種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞，應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜,就可以進(jìn)行共培養(yǎng)、細(xì)胞趨化、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲等多種方面的研究。

② 劃痕實(shí)驗(yàn)：劃痕實(shí)驗(yàn)又稱為創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)，是一種簡單、廉價(jià)的方法，也是最早發(fā)展起來的研究定向細(xì)胞在體外遷移的方法之一。該方法模擬了細(xì)胞在體內(nèi)愈合過程中的遷移過程?；静襟E包括在細(xì)胞單層中創(chuàng)建一個(gè)“傷口”，在細(xì)胞遷移過程中在開始和定期捕獲圖像以關(guān)閉傷口，以及比較圖像以確定細(xì)胞遷移速率。

4）血管形成：

目前通常所說的血管形成實(shí)驗(yàn)是指管腔形成實(shí)驗(yàn)。管腔形成反映毛細(xì)血管的早期過程，是體外檢查內(nèi)皮細(xì)胞功能最完整的指標(biāo)。血管形成過程中內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)形成細(xì)胞條索，然后形成管腔，體外在特定條件下如基質(zhì)膠、膠原等培養(yǎng)時(shí)也能形成管腔。藥物通過抑制管腔形成或使形成的管腔斷裂來達(dá)到抑制血管形成的作用。借助計(jì)算機(jī)軟件計(jì)算小管數(shù)及小管之間的連接數(shù)及小管的長度和面積，可定量分析藥物對(duì)管腔形成的影響。