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RNA甲基化檢測

   作者:管理   發(fā)布時間:2022-06-23 16:52:28

RNA上修飾的種類很多,包括甲基化、羥甲基化、乙?;?。m6ARNA上最豐富的一種修飾,平均每條轉(zhuǎn)錄本有1~3m6A修飾。m6A存在于大多數(shù)真核生物(包括哺乳動物、昆蟲、植物和酵母)和一些病毒的mRNA中,也存在于tRNA、rRNA、小核RNAsmall nuclear RNAsnRNA)以及一些長鏈非編碼RNALong non-coding RNA,lncRNA)。m6A甲基化(N6-methyladenosine)是指RNA分子在RNA甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體(MTC)的作用下將甲基選擇性地添加到特定腺嘌呤堿基上的過程。

1m6A RNA甲基化定量檢測試劑盒

m6A RNA甲基化定量檢測試劑盒(比色法),可以通過比色的方法定量RNAN6-甲基腺嘌呤(m6A)。它可以直接檢測哺乳動物、植物、真菌細菌和病毒的總RNA樣本的m6A的甲基化程度。

2m6A甲基酶活性/抑制分析試劑盒

用于基于吸光度的核提取物或純化酶中總m6A去甲基酶活性/抑制的測量,關(guān)鍵點:1、檢測多種物種中的m6A RNA去甲基化酶活性/抑制分析檢測(哺乳動物、植物、真菌和細菌);2、使用m6A抗體的比色ELISA樣測定;3、檢出限低至2 μg 核提取物和50 ng純化的酶。

3RNA甲基化測序(MeRIP

MeRIP-Seq methylated RNA immunoprecipitation sequencing)結(jié)合RNA-蛋白免疫共沉淀和高通量測序技術(shù),可實現(xiàn)全轉(zhuǎn)錄組水平上RNA甲基化分析。由于甲基化修飾約占所有RNA修飾的60%以上,而N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A),作為最常見的一種轉(zhuǎn)錄后修飾,介導(dǎo)了超過80%RNA甲基化?;?/span>MeRIP-Seq分析RNA甲基化模式,加速了癌癥發(fā)生和轉(zhuǎn)移、胚胎發(fā)育、脂類代謝、環(huán)狀RNA翻譯和DNA損傷修復(fù)等生物學(xué)功能和作用機制的研究。銳博生物利用單克隆抗體抓取存在m6A修飾的RNA片段,結(jié)合高通量測序,實現(xiàn)轉(zhuǎn)錄組學(xué)范圍內(nèi)的m6A peak檢測與motif分析。

4Dot blotting

使用Dot blotting檢測mRNAm6A甲基化總體水平的方法相對簡單、快速且成本較低。第一步是總RNA的提取。第二步Dot blotting,將2 μlmRNA直接轉(zhuǎn)移至經(jīng)核酸優(yōu)化的尼龍薄膜上。用抗m6A的抗體孵育薄膜。用二抗在室溫下孵育尼龍薄膜。在黑暗室溫下,用超薄膜ECL進行曝光,以獲得適當(dāng)?shù)钠毓鈺r間,最后顯影觀察。

5MeRIP-qPCR

MeRIP-qPCRm6A-IP-qPCR,即利用m6A抗體在富集到帶甲基化修飾的RNA后,下一步使用qPCR直接對富集到的RNA進行定量的一種技術(shù)。這種技術(shù)可以做到對發(fā)生甲基化的RNA進行相對定量,是一種低成本的檢測方法,僅需m6A抗體,A/G免疫磁珠,磁力架和qPCR儀及配套試劑盒即可開展這類實驗。

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