服務(wù)項(xiàng)目
核酸提取
核酸分為脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),其中RNA又可以根據(jù)功能的不同分為信使RNA(mRNA),核糖體RNA(rRNA)和轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(tRNA)。核酸中因?yàn)猷堰蕢A和嘧啶堿具有共軛雙鍵,所以核酸具有紫外吸收的特性,DNA鈉鹽的紫外吸收在260 nm附近,其吸光率以A260表示,在230 nm處于吸收低谷,因此可以使用紫外分光光度計(jì)對核酸進(jìn)行定量及定性測定。核酸提取類型主要包括:
1)總RNA提取
總RNA中,75-85%為rRNA(主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA),其余的由mRNA、小分子RNA(包括tRNA、5S rRNA、miRNA、snRNA等)以及核仁小分子RNA(small nuceolar RNA,snoRNA)等組成。主要采用TRIzol法。采用TRIzol裂解細(xì)胞,解聚染色體,釋放核酸;氯仿除蛋白,離心后回收水性酚相/水相(RNA提取必須是酸性酚或低鹽水相);異丙醇沉淀,乙醇洗滌,揮干,溶解于DEPC水。
2)基因組DNA提取
進(jìn)行基因結(jié)構(gòu)和功能研究以及基因診斷,通常要求得到的片段長度不小于100~200 kb。在DNA提取過程中應(yīng)盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素,以保證DNA的完整性,為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)。主要采用CTAB法、SDS法。以去污劑CTAB/SDS等處理樣品,破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),裂解細(xì)胞(裂解液通常還有EDTA抑制DNase活性,Tris-Cl緩沖防止核酸被破壞,同時(shí)具有較高的NaCl濃度,維持核酸溶解性);加入氯仿去除蛋白復(fù)合物(有機(jī)相),離心分離,回收水相(內(nèi)含核酸);異丙醇沉淀DNA,離心回收絮狀DNA,梯度乙醇清洗,自然揮干,溶解DNA與TE buffer。
3)質(zhì)粒抽提
質(zhì)粒抽提方法即去除RNA,將質(zhì)粒與細(xì)菌基因組 DNA分開,去除蛋白質(zhì)及其它雜質(zhì),以得到相對純凈的質(zhì)粒。主要采用試劑盒、堿裂解法。